EdU细胞增殖检测方法—更出色的BrdU细胞增殖检测替代方法-赛默飞
更出色的EdU细胞增殖检测方法-代替您繁琐的BrdU细胞增殖检测法Invitrogen Click-iT EdU细胞增殖分析试剂采用Click-iT化学技术，可为新合成的DNA检测与定量提供比传统BrdU细胞增殖检测方法更优秀的替代物。 当在DNA合成过程中掺入修饰的核苷EdU（5-乙炔基-2'-脱氧尿苷）时，可以通过快速的“Click-iT化学”反应检测到它，并且对细胞的破坏作用最小。
Click-iT EdU技术Click-iT EdU检测技术相比于BrdU具有更简便、更快速、更易操作的优点。 与使用溴脱氧尿苷(BrdU)检测法不同，Click-iT EdU检测法不是基于抗体，因此并不需要DNA变性以检测掺入的核苷。 此外，Click-iT EdU可以与R-PE、R-PE tandems 和GFP等荧光蛋白复用提高效力。当您平行比较这些方法时，Click-iT EdU和Invitrogen Click-iT Plus EdU在测定细胞增殖方面的优势是显而易见的。（表格1）。
Click-iT EdU技术优势：快速—检测时间低至60分钟。准确—没有抗体和变性步骤产生的假信号。精简—简单六步方案。Click-iT Plus EdU试剂盒优势：支持多色检测—可与R-PE（和双联体）及荧光蛋白兼容。表1. Click-iT EdU、Click-it Plus EdU和BrdU检测法比较。 Click-iT EdU试剂盒Click-iT Plus EdU试剂盒BrdU多重与大多数标准荧光染料（不包括FP和双联体）联用
与所有标准荧光染料（包括GFP和其他FP及敏感的双联体）联用
可变的
基础实验所需的试剂Click-iT EdU或Click-iT Plus EdU流式细胞检测试剂盒FIX & PERM 固定和破膜试剂盒BrdUFIX & PERM固定和破膜试剂盒Alexa Fluor 488抗-BrdU 抗体DNase7-AAD出结果时间 （标记+检测）
通常 < 90分钟
5小时至过夜
步骤数
6
（无需多个破膜步骤，
不需要 Dnase 处理）
~10
DNA变性
无
需要
Click-iT Edu检测试剂盒选择指南
Click-iT Plus EdU 试剂盒Click-iT EdU 试剂盒 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 350 流式试剂盒 Click-iT Plus EdU Pacific Blue 流式试剂盒Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 流式试剂盒 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 594 流式试剂盒Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 647流式试剂盒检测基本原理作为传统BrdU检测的替代方法，将修饰的胸苷类似物EdU掺入增殖细胞中新合成的DNA中。使用明亮且光稳定的Invitrogen Alexa Fluor染料，通过快速、高度特异性的点击反应标记细胞。多重Click-iT EdU Plus试剂盒具有最大限度的多色检测性能。 温和的点击化学方案不会破坏细胞表位（与BrdU方案不同）并且与标准抗体标记（小分子有机染料，如 FITC 或 Alexa Fluor染料，以及敏感的双联体，例如 Invitrogen R-PE-Cy5或APC-Cy7），荧光蛋白和常见的细胞染色方法兼容。读取荧光信号在EdU孵育期间合成DNA的细胞核中积累。荧光标记Alexa Fluor 350 吡啶甲基叠氮化物Pacific Blue 吡啶甲基叠氮化物Alexa Fluor 488 吡啶甲基叠氮化物Alexa Fluor 594 吡啶甲基叠氮化物Alexa Fluor 647 吡啶甲基叠氮化物激光(nm)UV405488532 或 561633/635Ex/Em (nm)350/438410/455495/519532 或 561/615650/668样品类型针对活细胞进行了优化，固定之后进行点击检测步骤。参考文献引用文献产品规格50 个反应50 个反应50 个反应100 个反应50 个反应50 个反应100 个反应货 号 C10645C10636C10632C10633C10646C10634C10635 Click-iT EdU Pacific Blue流式细胞分析试剂盒 Click-iT EdU Alexa Fluor 488流式细胞分析试剂盒Click-iT EdU Alexa Fluor 647流式细胞分析试剂盒检测基本原理标准的Click-iT EdU 试剂盒兼容性有限；它们与有机染料标签（如FITC或Alexa Fluor染料）兼容，但它们与荧光蛋白或 R-藻红蛋白（R-PE）和基于R-PE的双联体（即R-PE-Cy5结合物）不兼容。多重标准的Click-iT EdU试剂盒兼容性有限；它们与有机染料标签（如FITC 或 Alexa Fluor 染料）兼容，但它们与荧光蛋白或 R-藻红蛋白（R-PE）和基于R-PE的双联体（即R-PE-Cy5结合物）不兼容。 若想与荧光蛋白和基于 APC 和 R-PE 的灵敏双联体兼容，我们建议使用 Click-iT EdU Plus 流式细胞分析试剂盒。读取荧光信号在EdU孵育期间合成DNA的细胞核中积累。荧光标记Pacific Blue 叠氮化物Alexa Fluor 488 叠氮化物Alexa Fluor 647 叠氮化物激光器405 nm488 nm633/635 nmEx/Em (nm)410/455495/519650/668样品类型针对活细胞进行了优化，固定之后进行点击检测步骤。参考文献引用文献产品规格50 个反应50 个反应100 个反应50个反应100 个反应货 号 C10418C10424C10420C10425C10419
Click-iT Plus EdU 试剂盒
Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 350 流式试剂盒 Click-iT Plus EdU Pacific Blue 流式试剂盒Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 流式试剂盒 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 594 流式试剂盒Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 647流式试剂盒检测基本原理作为传统BrdU检测的替代方法，将修饰的胸苷类似物EdU掺入增殖细胞中新合成的DNA中。使用明亮且光稳定的Invitrogen Alexa Fluor染料，通过快速、高度特异性的点击反应标记细胞。多重Click-iT EdU Plus试剂盒具有最大限度的多色检测性能。 温和的点击化学方案不会破坏细胞表位（与BrdU方案不同）并且与标准抗体标记（小分子有机染料，如 FITC 或 Alexa Fluor染料，以及敏感的双联体，例如 Invitrogen R-PE-Cy5或APC-Cy7），荧光蛋白和常见的细胞染色方法兼容。读取荧光信号在EdU孵育期间合成DNA的细胞核中积累。荧光标记Alexa Fluor 350 吡啶甲基叠氮化物Pacific Blue 吡啶甲基叠氮化物Alexa Fluor 488 吡啶甲基叠氮化物Alexa Fluor 594 吡啶甲基叠氮化物Alexa Fluor 647 吡啶甲基叠氮化物激光(nm)UV405488532 或 561633/635Ex/Em (nm)350/438410/455495/519532 或 561/615650/668样品类型针对活细胞进行了优化，固定之后进行点击检测步骤。参考文献引用文献产品规格50 个反应50 个反应50 个反应100 个反应50 个反应50 个反应100 个反应货 号 C10645C10636C10632C10633C10646C10634C10635
Click-iT EdU 试剂盒
Click-iT EdU Pacific Blue流式细胞分析试剂盒 Click-iT EdU Alexa Fluor 488流式细胞分析试剂盒Click-iT EdU Alexa Fluor 647流式细胞分析试剂盒检测基本原理标准的Click-iT EdU 试剂盒兼容性有限；它们与有机染料标签（如FITC或Alexa Fluor染料）兼容，但它们与荧光蛋白或 R-藻红蛋白（R-PE）和基于R-PE的双联体（即R-PE-Cy5结合物）不兼容。多重标准的Click-iT EdU试剂盒兼容性有限；它们与有机染料标签（如FITC 或 Alexa Fluor 染料）兼容，但它们与荧光蛋白或 R-藻红蛋白（R-PE）和基于R-PE的双联体（即R-PE-Cy5结合物）不兼容。 若想与荧光蛋白和基于 APC 和 R-PE 的灵敏双联体兼容，我们建议使用 Click-iT EdU Plus 流式细胞分析试剂盒。读取荧光信号在EdU孵育期间合成DNA的细胞核中积累。荧光标记Pacific Blue 叠氮化物Alexa Fluor 488 叠氮化物Alexa Fluor 647 叠氮化物激光器405 nm488 nm633/635 nmEx/Em (nm)410/455495/519650/668样品类型针对活细胞进行了优化，固定之后进行点击检测步骤。参考文献引用文献产品规格50 个反应50 个反应100 个反应50个反应100 个反应货 号 C10418C10424C10420C10425C10419
Click-iT EdU 流式细胞分析试剂盒背后的科学知识
Click-iT EdU 技术的优势在于化学方面 - 独特的小分子和低背景的标记物以及检测基团之间特异性共价反应。 5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）是含有炔烃的核苷类似物。 在铜催化反应中，炔与染料标记的叠氮化物反应，形成稳定的共价键。 小分子的叠氮化物试剂可以有效地接触DNA而无需对细胞进行破坏处理。 这样大大地简化了测定，获得的结果与使用传统的BrdU相似（或更好）（图1和图2）。
图1： 使用 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 流式细胞检测试剂盒和FxCycle Violet 染色剂进行细胞增殖分析。 根据 Invitrogen Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488流式细胞检测试剂盒操作步骤，用 10 μM EdU 处理 Jurkat 细胞1小时并用 Invitrogen Alexa Fluor 488 吡啶甲基叠氮化物染色，然后用Invitrogen Violet 染色剂染色。 使用 488 nm （Click-iT EdU Alexa Fluor 488 染色剂）或 405 488 nm （对于FxCycle Violet 染色剂）激发波长，通过流式细胞术分析细胞。 (A) 显示S期细胞（DNA合成、包括 EdU 掺入）和G2/M或G0/G1细胞明显分离的直方图。 (B) 显示使用 FxCycle Violet 染色剂时的 DNA 含量分布直方图，G0/G1 和 G2/M 期峰由 S 期分割。 (C) 显示共阳性细胞的双参数 Click-iT Plus EdU 和 FxCycle 图，直接测量S期细胞百分比。
图 2. 使用mCherry荧光蛋白和 FxCycle Far Red染色剂进行 Alexa Fluor 488 Click-iT Plus EdU标记。 将表达mCherry的A549细胞使用10 µM EdU处理2小时，并按照推荐的染色方案检测。 图 A 为用 Alexa Fluor 488吡啶叠氮化物标记的细胞的直方图，用于鉴定S期细胞。 图 B 和 C 分别为存在（图B）和不存在铜时（图C）的Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 吡啶叠氮化物标记细胞发出的mCherry荧光，证明在点击反应中mCherry荧光保留。 图 D 为 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 和 Invitrogen FxCycle Far Red染色剂染色的DNA含量双参数图；共阳性的细胞处于S期。
包含Click-iT Plus EdU的流式Panel 与初代Click-iT EdU流式细胞检测相比，Click-iT Plus配方具有更好的多色兼容检测能力。 Click-iT Plus EdU检测可与R-PE和R-PE双联体，以及各种荧光蛋白（如GFP和mCherry）配合使用，同时还具有初代Click-iT EdU检测精确、快速的特点。
可与之联用的有：大多数标准荧光抗体敏感的 R-PE 荧光染料，如 R-PE-Cy7GFP、mCherry 和其他荧光蛋白细胞表面和细胞内标记物细胞周期染料 图 3. 用于评估人类T细胞CD3和DNA链断裂的免疫表型分析实验结果。 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488流式细胞检测试剂盒和 Hu CD3 PE-Cy7 荧光的双参数图。
C10418,C10425,C10420,C10424,C10419
C10645,C10636,C10632,C10633,C10646,C10634,C10635
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